吉列替尼(舒加坦)对比其他FLT3抑制剂的优势在哪里？

吉尔特替尼是一种I型抑制剂

Gilteritinib是一种吡嗪甲酰胺衍生物，由Astellas Pharma，股份有限公司（日本东京）合成和开发。计算模型研究表明，该药物与ATP结合位点结合，并与F691看门人残基发生一些相互作用。它是一种I型抑制剂，通常不受激活环突变的影响（如D835）。使用不同激酶的细胞内结构域（表达为GST融合蛋白以促进纯化）的体外激酶测定表明，吉地替尼对FLT3、ALK和AXL（以及其他激酶）具有活性。基于细胞的测定几乎总是能更好地估计药物在体内的活性。使用多种AML细胞培养模型（MV4-11、Molm13/14、SEMK2和Ba/F3转染子），吉地替尼（在含有10%胎牛血清的细胞培养基中）抑制FLT3-ITD受体自身磷酸化的IC50（50%活性被抑制的浓度）为~1nM，对于野生型FLT3受体大约为5nM。这种程度的效力已被证实可对抗体外培养的原发性患者FLT3-ITD AML母细胞。

吉列替尼(舒加坦)对比其他FLT3抑制剂的优势在哪里？

吉尔特替尼是多靶向的，但它对FLT3的抑制作用比其他激酶大得多

有几种方法可以确定TKI的选择性和效力。体外激酶测定法可用于广泛筛选任何抑制剂对人类基因组中发现的激酶的活性，制药公司为此目的使用了许多市售的激酶测定法。通常，他们使用一组激酶，通常是GST融合蛋白，从杆状病毒系统中表达。对于跨膜受体（如FLT3），只有细胞质部分在测定中表达和使用，激酶底物通常是非常人工的（如酶联免疫吸附测定板上的肽序列）。这些特征解释了体外激酶测定结果与患者体内药物实际抑制的结果之间经常存在的显著差异。这些测定不能替代靶细胞类型内抑制作用的评估，但通常提供了比较不同药物相对选择性的方法。在这样做的过程中，使用相同的测定法是很重要的。另一种方法是激酶扫描平台（Eurofins，San Diego，CA），它确定药物与星形孢菌素（或类似配体）竞争结合噬菌体表达的激酶的能力。因此，它不是激酶测定法，而是药物竞争测定法，这种相对简单的方法实际上可以提供一种比较不同药物的更准确的方法。87然而，在解释激酶扫描测定法时，了解测定法中使用的药物浓度很重要。优选地，它应该近似于服用药物的患者在稳态下所达到的水平，考虑到血浆蛋白结合相对于测定条件的差异。吉地替尼是多靶向的，但重要的是，它与FLT3的突变型结合比与野生型FLT3结合更有效。这一点，再加上它对KIT的无活性，可能是它比其他FLT3抑制剂骨髓抑制作用相对较弱的原因。与它作为I型抑制剂的状态一致，它对FLT3-TKD突变体表现出优异的结合活性，对F691L看门人的活性略低。

吉尔特替尼对AXL有抑制作用

AXL是Tyro3-AXL-Mer家族的一种受体酪氨酸激酶，在多种组织中执行各种稳态功能。这些受体结合膜相关配体，如Gas6和蛋白S。有一些证据表明，AXL激活有助于AML的化疗耐药性，并特别有助于FLT3激活和对FLT3抑制的反应或耐药性。尽管吉地替尼被吹捧为AXL抑制剂，但在基于细胞的测定中，针对AXL的IC50远高于针对FLT3的IC50（41nM）；因此，目前尚不清楚AXL抑制在对吉地替尼的任何反应中起到了多大作用（如果有的话）。

吉尔特替尼相对不抑制骨髓增生

FLT3和KIT是两种结构相关的RTK，在造血中起关键作用。吉地替尼对c-KIT的IC50约为100nM（来自基于细胞的测定），比对FLT3-ITD受体的IC50高2个数量级。如上所述，与大多数FLT3抑制剂一样，与ITD突变型相比，吉特瑞替尼对野生型FLT3的效力降低了约五倍。吉特瑞替尼对野生类型FLT3的抑制较弱，再加上对KIT缺乏活性，预示着对携带野生型FLT3的AML细胞缺乏活性，以及与其他FLT3抑制剂相比，骨髓抑制程度较低。骨髓祖细胞测定的数据证实了这些预测。在骨髓祖细胞分析中，吉地替尼的FLT3-ITD抑制浓度对正常红系和髓系集落生长几乎没有影响。然而，考虑到FLT3似乎在早期造血中发挥的作用，任何FLT3抑制剂都可能产生一定程度的骨髓抑制。

吉尔特替尼对TKD突变的FLT3具有活性

FLT3-TKD突变在大约7%的新诊断AML患者中发现，尽管它们不像ITD突变那样对预后产生负面影响。复发时，FLT3-TKD-突变通常会丢失，但它们仍然存在，偶尔似乎会起到驱动作用（即，疾病具有高度增殖性，FLT3-TKD-VAF很高）。吉尔特替尼对所有FLT3 D835变体（在Ba/F3细胞中表达）具有优异的抑制活性，它可能是至少一部分具有该突变亚型的患者的有效单一疗法。需要进一步的研究来确定哪些额外的临床和分子特征可以预测FLT3-TKD AML对吉地替尼的反应。

吉尔特替尼对FLT3-TKD突变有效，这些突变赋予II型抑制剂耐药性

II型FLT3抑制剂，如索拉非尼和喹唑替尼，是第一批在R/R FLT3-ITD AML中显示出显著临床活性的药物，但它们对FLT3-TKD突变几乎没有活性。从AML患者中分离的单细胞的遗传分析表明，毫不奇怪，这些突变可能在复发时以亚临床水平存在。这些FLT3-TKD克隆，通常位于D835残基，在II型抑制剂的选择性压力下出现，并导致（通常非常快的）疾病进展。事实上，这一现象代表了FLT3是AML中一个重要驱动突变的重要证据。Gilteritinib抑制FLT3自身磷酸化，并在体外对直接从对索拉非尼和喹唑替尼产生耐药性的患者中分离的母细胞诱导强大的细胞毒性作用。在体外，Gilteritini对FLT3的抑制活性不受D835的任何突变的影响，这基本上消除了这种对治疗的耐药性。值得注意的是，与结构模型的预测一致，在守门人残基（F691）存在突变的情况下，吉地替尼在抑制FLT3方面的效果明显较差。这将是对吉地替尼可预测的抗性模式。此外，早期对其他I型抑制剂的研究表明，下游或平行途径的激活，如RAS突变，92可能会产生对吉地替尼的耐药性，这一预测正在临床研究中得到证实。

Gilteritinib在体内有效抑制FLT3-ITD

在用MV4-11 AML细胞（FLT3-ITD突变）异种移植的免疫缺陷小鼠中，口服吉替替尼抑制肿瘤内FLT3自磷酸化并导致肿瘤缩小。同样，在用FLT3-ITD、FLT3-TKD和FLT3-ITD-TKD的Ba/F3构建体异种移植的小鼠中，用口服吉替尼治疗诱导肿瘤消退。最后，对口服吉地替尼治疗的AML患者在稳态下采集的血浆样本进行PIA分析，结果显示FLT3自磷酸化完全抑制，表明体内持续存在高水平的FLT3抑制。